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PCR實驗室布局、通風系統設計及壓力控制

發表時間(jian): 2020-12-18

PCR實驗室又(you)叫(jiao)基因(yin)擴(kuo)增實驗室。PCR是聚合酶(mei)鏈式反應(PolymeraseChainReaction)的(de)(de)(de)(de)簡(jian)稱。是一種分(fen)子生(sheng)物學技(ji)術(shu),用(yong)于(yu)(yu)放大特(te)(te)(te)定(ding)的(de)(de)(de)(de)DNA片段(duan),可(ke)看(kan)作生(sheng)物體外的(de)(de)(de)(de)特(te)(te)(te)殊DNA復制。用(yong)于(yu)(yu)基因(yin)檢(jian)測,具(ju)有高度(du)敏感性(xing)、特(te)(te)(te)異性(xing)、快速、簡(jian)單等特(te)(te)(te)點,能將(jiang)傳統方(fang)法難以檢(jian)測的(de)(de)(de)(de)極少數病(bing)(bing)毒DNA片段(duan)擴(kuo)增百萬(wan)倍以上,從(cong)而大大提高疾(ji)病(bing)(bing)的(de)(de)(de)(de)診斷(duan)水(shui)平。它不僅可(ke)用(yong)于(yu)(yu)基因(yin)分(fen)離、克隆(long)和核酸序(xu)列分(fen)析(xi)等基礎研(yan)究,還可(ke)用(yong)于(yu)(yu)疾(ji)病(bing)(bing)的(de)(de)(de)(de)診斷(duan)或(huo)任何有DNA,RNA的(de)(de)(de)(de)地方(fang),又(you)稱無細胞分(fen)子克隆(long)或(huo)特(te)(te)(te)異性(xing)DNA序(xu)列體外引物定(ding)向(xiang)酶(mei)促擴(kuo)增技(ji)術(shu)。

一(yi)、PCR實驗室平(ping)面(mian)布(bu)局

PCR擴(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)檢驗實(shi)驗室原則上分(fen)為三個單獨(du)的工作區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)域:試(shi)(shi)劑貯(zhu)(zhu)存和(he)(he)準備(bei)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)、標本制(zhi)備(bei)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)、擴(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)和(he)(he)擴(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)產物(wu)分(fen)析區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)。為避免交(jiao)叉污(wu)染,進(jin)入各個工作區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)域必須嚴格(ge)遵循單一方向進(jin)行,即只能從試(shi)(shi)劑貯(zhu)(zhu)存和(he)(he)準備(bei)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)→標本制(zhi)備(bei)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)→擴(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)和(he)(he)擴(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)產物(wu)分(fen)析區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)。各實(shi)驗區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)之(zhi)間的試(shi)(shi)劑及樣品傳遞應通(tong)過傳遞窗進(jin)行。

二、實驗室空調通(tong)風系統設計及壓力控制

PCR實(shi)驗(yan)(yan)(yan)室并沒(mei)有嚴格的凈化等級要(yao)求(qiu),但是為避免各個實(shi)驗(yan)(yan)(yan)區域間交叉(cha)污染的可能(neng)性,宜(yi)采用全送(song)全排(pai)的氣流組織形(xing)式。同(tong)時,要(yao)嚴格控制送(song)、排(pai)風(feng)的比例以(yi)保證各實(shi)驗(yan)(yan)(yan)區的壓力要(yao)求(qiu)。

1、試劑(ji)貯存和準備區

該實(shi)驗區(qu)(qu)(qu)(qu)主要進行的(de)(de)操(cao)作為(wei)貯(zhu)存試(shi)(shi)(shi)劑(ji)的(de)(de)制備(bei)、試(shi)(shi)(shi)劑(ji)的(de)(de)分裝和(he)主反應混(hun)合液的(de)(de)制備(bei)。試(shi)(shi)(shi)劑(ji)和(he)用于樣品制作的(de)(de)材(cai)料(liao)應直(zhi)接運送至該區(qu)(qu)(qu)(qu),不(bu)得經過其他區(qu)(qu)(qu)(qu)域。試(shi)(shi)(shi)劑(ji)原材(cai)料(liao)必(bi)須貯(zhu)存在本(ben)區(qu)(qu)(qu)(qu)內,并(bing)在本(ben)區(qu)(qu)(qu)(qu)內制備(bei)成(cheng)所需的(de)(de)貯(zhu)存試(shi)(shi)(shi)劑(ji)。對與氣流壓(ya)(ya)力(li)的(de)(de)控制,本(ben)區(qu)(qu)(qu)(qu)應對外界(jie)保持微正壓(ya)(ya)。

2、標本制備區

該區(qu)域主(zhu)要(yao)進行的(de)(de)操作(zuo)為(wei)樣本(ben)的(de)(de)保(bao)存、核酸(RNA、DNA)提(ti)取、貯存及(ji)其加入(ru)至擴增(zeng)反應管和(he)測定DNA的(de)(de)合(he)成(cheng)。本(ben)區(qu)的(de)(de)壓力梯度要(yao)求(qiu)為(wei):相(xiang)對于鄰近(jin)區(qu)域為(wei)正(zheng)壓,以(yi)避(bi)免(mian)從鄰近(jin)區(qu)進入(ru)本(ben)區(qu)的(de)(de)氣溶(rong)膠污染。另外,由于在(zai)加樣操作(zuo)中可能會發生氣溶(rong)膠所致的(de)(de)污染,所以(yi)應避(bi)免(mian)在(zai)本(ben)區(qu)內不必要(yao)的(de)(de)走動(dong)。

3、擴(kuo)增(zeng)和(he)擴(kuo)增(zeng)產物分(fen)析區

該區域主(zhu)要進(jin)(jin)行的(de)操作(zuo)為DNA擴(kuo)增和(he)擴(kuo)增片段(duan)的(de)測(ce)定(ding)。此(ci)外,已(yi)制備的(de)DNA模板(來自(zi)樣本(ben)(ben)制備區)的(de)加(jia)入(ru)和(he)主(zhu)反(fan)應(ying)(ying)混合液(ye)(ye)(來自(zi)試劑貯存和(he)制備區)制備成反(fan)應(ying)(ying)混合液(ye)(ye)等也(ye)可在(zai)(zai)本(ben)(ben)區內進(jin)(jin)行。本(ben)(ben)區的(de)壓力梯度(du)要求為:相對于鄰近(jin)區域為負壓,以避免(mian)氣溶膠(jiao)從(cong)本(ben)(ben)區漏(lou)出。為避免(mian)氣溶膠(jiao)所致的(de)污染,應(ying)(ying)盡量(liang)減少在(zai)(zai)本(ben)(ben)區內的(de)不必要的(de)走動。個別操作(zuo)如加(jia)樣等應(ying)(ying)在(zai)(zai)超凈臺內進(jin)(jin)行。

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